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一種大腸桿菌裂解液及其制備方法和應用.pdf

摘要
申請專利號:

CN201910068025

申請日:

20190124

公開號:

CN109628313A

公開日:

20190416

當前法律狀態:

公開

有效性:

審中

法律詳情:

公開

IPC分類號:

C12N1/06;C12Q1/10;C12R1/19

主分類號:

C12N1/06;C12Q1/10;C12R1/19

申請人:

長春萬成生物電子工程有限公司

發明人:

趙鋼;唐春;王竑婷

地址:

130000 吉林省長春市高新產業開發區順達路789號鴻達光電子產業園三號樓廠房三層301

優先權:

專利代理機構:

11227

代理人:

劉猛;趙青朵

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內容摘要

本發明涉及水質微生物檢測技術領域,公開了一種大腸桿菌裂解液及其制備方法和應用。本發明所述裂解液包括脫水劑、滲透劑和表面活性劑;其中所述脫水劑為氯化鈉、EDTA?2Na或氫氧化鈉;所述滲透劑為甘油、聚乙二醇、吐溫或曲拉通?100;所述表面活性劑為聚乙烯吡咯烷酮或乙基纖維素。本發明以適宜的組分組成大腸桿菌裂解液,有效針對水質和食品中大腸桿菌快速裂解,僅需10min耗時即可釋放半乳糖酶,與含有半乳糖苷顯色劑(X?GAL)的試紙條反應顯藍色完成對大腸桿菌的檢測,可將整個大腸桿菌檢測過程縮短至30min以內,相比現有產品較長的耗時,顯著提高了水質和食品中大腸桿菌的檢測效率。

權利要求書

1.一種大腸桿菌裂解液,其特征在于,包括脫水劑、滲透劑和表面活性劑;其中所述脫水劑為氯化鈉、EDTA-2Na或氫氧化鈉;所述滲透劑為甘油、聚乙二醇、吐溫或曲拉通-100;所述表面活性劑為聚乙烯吡咯烷酮或乙基纖維素。 2.根據權利要求1所述裂解液,其特征在于,所述脫水劑的濃度為0.1-30%。 3.根據權利要求1所述裂解液,其特征在于,所述滲透劑的濃度為0.1-10%。 4.根據權利要求1所述裂解液,其特征在于,所述表面活性劑的濃度為0.01-5%。 5.根據權利要求1所述裂解液,其特征在于,所述聚乙二醇為聚乙二醇2000。 6.根據權利要求1所述裂解液,其特征在于,所述吐溫為吐溫80。 7.根據權利要求1所述裂解液,其特征在于,所述聚乙烯吡咯烷酮為K30。 8.權利要求1-7任意一項所述裂解液在檢測水質或食品中大腸桿菌和/或制備水質或食品大腸桿菌檢測試劑盒中的應用。 9.權利要求1所述裂解液的制備方法,其特征在于,稱取脫水劑、滲透劑和表面活性劑,加水配制成裂解液。

說明書


一種大腸桿菌裂解液及其制備方法和應用
技術領域


本發明涉及水質微生物檢測技術領域,具體涉及一種大腸桿菌裂解液及其制備方
法和應用。


背景技術


大腸埃希氏菌通常被稱為大腸桿菌,是Escherich在1885年發現的,大腸桿菌屬于
革蘭氏陰性細菌,大小0.5×1~3微米,周生鞭毛,能運動,無芽孢。能發酵多種糖類產酸、產
氣,是人和動物腸道中的正常棲居菌,嬰兒出生后即隨哺乳進入腸道,與人終身相伴,幾乎
占糞便干重的1/3。


國家規定,每毫升飲用水中的菌落總數小于100,每100毫升水中不得檢出總大腸
桿菌群。


大腸菌群數是污水水質分析中常用的細菌學指標,用每升水中的大腸菌群數表
示。大腸菌群包括大腸桿菌等幾種大量存在于人體腸道中的細菌,因此糞便中大量存在大
腸菌群。在一般情況下,大腸菌群屬于非致病菌。如在水樣中檢測出大腸菌群,表明水被糞
便所污染。由于水致傳染病菌和病毒的生長環境與大腸菌群基本相同,而對水致傳染病菌
和病毒的檢測又比較困難,因此通常用大腸菌群作為間接的檢測指標。如果水中的大腸菌
群數超過規定的指標,就認為這些水中可能含有水致傳染病菌和病毒,如人體直接接觸這
些水就可能會被傳染上疾病。


目前市場上有水質糞大腸菌群檢驗紙片、大腸桿菌O157:H7快速檢測試紙條。此兩
種產品使用過程中都需要采樣,利用恒溫培養箱培養24小時,不僅操作不方便,而且檢測時
間長(大于24小時),兩種產品均是利用微生物檢測(國標)方法原理制備。而且上述產品使
用領域局限性大,只能用于食品、餐具表面微生物測試,或者致病性大腸桿菌的測試,不具
備普遍適用性。


此外,市場上也有一些試劑公司生產的裂解液,如Western及IP細胞裂解液、RIPA
裂解液(強、中或弱)、SDS裂解液、NP-40裂解液,主要用作Western、IP或co-IP,成分主要包
括1%Triton X-100、1%deoxycholate、0.1%SDS以及1%NP-40等。然而這些裂解液不是專
門用來檢測大腸桿菌的,而是用作其他用途的,并且上述裂解液的缺點是裂解時間非常長,
需要2-24個小時。


發明內容


有鑒于此,本發明的目的在于提供一種大腸桿菌裂解液及其制備方法,使得所述
裂解液能夠快速裂解水質或食品中的大腸桿菌,縮短耗時,并可應用于水質和食品大腸桿
菌的檢測中。


為了實現上述發明目的,本發明提供了如下技術方案:


一種大腸桿菌裂解液,包括脫水劑、滲透劑和表面活性劑;其中所述脫水劑為氯化
鈉、EDTA-2Na或氫氧化鈉;所述滲透劑為甘油、聚乙二醇、吐溫或曲拉通-100;所述表面活性
劑為聚乙烯吡咯烷酮或乙基纖維素。


作為優選,所述脫水劑的質量百分比濃度為0.1-30%,更優選為1-2%;所述滲透
劑的質量百分比濃度為0.1-10%,更優選為0.1-0.2%;所述表面活性劑的質量百分比濃度
為0.01-5%。在本發明具體實施方式中,所述脫水劑的質量百分比濃度為1%或2%,所述滲
透劑的質量百分比濃度為0.1%或0.2%,所述表面活性劑的質量百分比濃度為0.01%。


在本發明具體實施方式中,所述聚乙二醇為聚乙二醇2000,所述聚乙烯吡咯烷酮
為K30,所述吐溫為吐溫80。


同時,本發明還提供了所述裂解液的制備方法,包括:


稱取脫水劑、滲透劑和表面活性劑,加水配制成裂解液;


采用本發明裂解液對大腸桿菌菌液、無菌水以及其他菌落菌液進行檢測,結果顯
示,采用裂解液進行10min裂解,然后用配套的檢測試紙條(試紙條上有半乳糖苷顯色劑X-
GAL,與大腸桿菌裂解后的釋放物反應顯藍色)浸入待測樣品10min后,只有大腸桿菌菌液顯
示藍色,無菌水和其他菌落菌液均無色,這說明本發明裂解液僅耗時10min就可以完成水質
樣品中大腸桿菌的檢出,而且準確度高,不易出現假陽性結果?;趦灝惖脑囼灲Y果,本發
明提出了所述裂解液在檢測水質中大腸桿菌和/或制備水質大腸桿菌檢測試劑盒中的應
用。


由以上技術方案可知,本發明以適宜的組分組成大腸桿菌裂解液,有效針對水質
和食品中大腸桿菌快速裂解,僅需10min耗時即可釋放半乳糖酶,與含有半乳糖苷顯色劑
(X-GAL)的試紙條反應顯藍色完成對大腸桿菌的檢測,可將整個大腸桿菌檢測過程縮短至
30min以內,相比現有產品較長的耗時,顯著提高了水質和食品中大腸桿菌的檢測效率。


附圖說明


圖1所示為不同樣品經過本發明試劑盒檢測后的顯色結果;其中,A為大腸桿菌菌
液顯色結果;B為無菌水顯色結果;C為霉菌菌液顯色結果;D為葡萄球菌菌液顯色結果。


具體實施方式


本發明公開了一種大腸桿菌裂解液及其制備方法和應用,本領域技術人員可以借
鑒本文內容,適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是,所有類似的替換和改動對本領域
技術人員來說是顯而易見的,它們都被視為包括在本發明。本發明所述裂解液及其制備方
法和應用已經通過較佳實施例進行了描述,相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和
范圍內對本文所述裂解液及其制備方法和應用進行改動或適當變更與組合,來實現和應用
本發明技術。


本發明所述水質包括生活飲用水、自來水、海水、漁業用水、泳池用水、農田灌溉
水、地下水、地表水、工業污水、試驗用水等;食品包括液態食品和固態食品;液態食品主要
包括果汁、牛奶、飲料、食品湯、液體原料等,用于檢測前,需要先過濾掉不溶物,使用活性炭
脫色,然后再檢測;而固態食品需要先用水溶解,過濾掉不溶物,使用活性炭脫色后方可檢
測。


以下就本發明所提供的一種大腸桿菌裂解液及其制備方法和應用做進一步說明。


實施例1:本發明所述裂解液


按照表1中任意一行的濃度加水配制裂解液。


表1







實施例2:本發明裂解液檢測試驗


選取OD值為0.3的大腸桿菌菌液、無菌水、OD值為0.3的霉菌菌液以及OD值為0.3的
葡萄球菌菌液作為試驗對象進行檢測;


向待測水樣中加入實施例1中的裂解液4,靜置10-20min;然后用所述試劑盒中的
檢測試紙條浸入待測水樣,保持10min后,若檢測試紙條顯示任意程度的藍色,即為陽性,檢
測試紙條無色或其他顏色為陰性。


檢測結果見表2和圖1;


表2










樣品名


干化學試紙檢測結果(靜置裂解10min)




大腸桿菌菌液(OD值0.3)


陽性(藍色)20min




無菌水


陰性(無色)20min




霉菌菌液(OD值0.3)


陰性(無色)20min




葡萄球菌菌液(OD值0.3)


陰性(無色)20min






由上述結果可以看出,只有大腸桿菌菌液發生變色顯示藍色,其他兩組均無顯色,
同時整個過程僅耗費20min(10min裂解+10min反應),這說明本發明試劑盒不僅耗時短,而
且準確度高,不易出現假陽性結果。此外,采用裂解液1-3進行檢測,三者均只有大腸桿菌菌
液發生變色顯示藍色,其他三組均無顯色。


同時,依據上述試驗方法,本發明采用不同OD值的大腸桿菌菌液進行檢測,結果見
表3。


表3










樣品名


干化學試紙檢測結果(20min裂解+10min反應)




大腸桿菌菌液(OD值0.3)


陽性(藍色+)30min




大腸桿菌菌液(OD值0.6)


陽性(藍色++)30min




大腸桿菌菌液(OD值0.9)


陽性(藍色+++)30min




大腸桿菌菌液(OD值1.2)


陽性(藍色++++)30min




大腸桿菌菌液(OD值1.5)


陽性(藍色+++++)30min






由表3結果可以看出,不同OD值的大腸桿菌菌液均能夠被本發明所述裂解液裂解
后檢出,且隨著OD值的增加,顯色強度越來越明顯。此外,采用裂解液1-3進行檢測,三者表
現出和表3相同的顯色趨勢。


以上所述僅是本發明的優選實施方式,應當指出,對于本技術領域的普通技術人
員來說,在不脫離本發明原理的前提下,還可以做出若干改進和潤飾,這些改進和潤飾也應
視為本發明的保護范圍。


關 鍵 詞:
一種 大腸桿菌 裂解 及其 制備 方法 應用
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