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具有改善貧血功能的竹筍提取物及其制備方法以及竹筍提取物復合制劑.pdf

摘要
申請專利號:

CN201110108720.6

申請日:

20080114

公開號:

CN102188636B

公開日:

20130918

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:

IPC分類號:

A61K36/899,A61K9/20,A61K9/48,A61K47/38,A23L1/29,A61P7/06,A61K31/555

主分類號:

A61K36/899,A61K9/20,A61K9/48,A61K47/38,A23L1/29,A61P7/06,A61K31/555

申請人:

中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所

發明人:

裴雪濤,師偉,陳琳,呂洋,岳文,白慈賢,南雪,施雙雙,張賽男,何麗娟,任祥亮,管利東

地址:

100850 北京市海淀區太平路27號

優先權:

CN201110108720A

專利代理機構:

北京尚誠知識產權代理有限公司

代理人:

魯兵

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內容摘要

本發明公開了一種具有改善貧血功能竹筍提取物及其復合制劑以及其制備方法,復合制劑由竹筍提取物、補鐵劑及其它助劑配制而成,其中:所述竹筍提取物是固形物、提取液或干粉,由新鮮竹筍或筍干水提醇提得到;所述補鐵劑為鐵卟啉或血紅素鐵。采用以上設計,本發明復合制劑中竹筍提取物含有豐富的葡萄糖、蛋白質以及多種元素,能夠刺激造血,擴充血容量,其復合鐵制劑對失血性貧血的恢復有更好促進作用。采用本發明的方法制備竹筍提取物,工藝簡單實用,并可以很好地保留竹筍原料中的各種有益成分,適于工業化生產。

權利要求書

1.一種具有改善貧血功能的竹筍提取物,為按下述方式獲得的竹筍提取液:將筍干粉碎至過200目篩,加入20倍的水熱回流提取,提取多次,合并全部提取液繼續蒸餾濃縮,收集餾余液得到竹筍提取液;且所述竹筍提取物中游離總氨基酸含量不低于質量百分比3.75%。2.權利要求1所述具有改善貧血功能竹筍提取物在制備抗貧血藥物或保健品中的應用。3.一種具有改善貧血功能竹筍提取物復合制劑,由權利要求1所述竹筍提取物、補鐵劑及其它助劑配制而成,所述竹筍提取物與補鐵劑的重量比為400~800:1。4.根據權利要求3所述竹筍提取物復合制劑,其特征在于,所述補鐵劑為鐵卟啉或血紅素鐵。5.根據權利要求3或4所述竹筍提取物復合制劑,其特征在于,為口服液,其中還包括選自阿斯巴甜、AK糖、檸檬酸羧、甲基纖維素鈉、黃原膠、紅牛香精、尼泊金乙酯中的一種或多種。6.根據權利要求5所述竹筍提取物復合制劑,其特征在于,按以下組分混合并用去離子水定容:竹筍提取物????????40~80重量份,氯化血紅素鐵??????0.1重量份,阿斯巴甜??????????20重量份,AK糖??????????????3重量份,檸檬酸????????????3重量份,羧甲基纖維素鈉????6重量份,黃原膠????????????2重量份,紅牛香精??????????0.8重量份,以及尼泊金乙酯????????1重量份。7.根據權利要求3或4所述竹筍提取物復合制劑,其特征在于,為片劑,按以下組分混合形成片芯:8.根據權利要求3或4所述竹筍提取物復合制劑,其特征在于,為膠囊,按以下組分混合形成:

說明書

本發明為分案申請。原申請日為2008年1月14日,申請號200810056154.7,發明名稱為“一種竹筍提取物復合制劑及其中竹筍提取物的制備方法”。

技術領域:

本發明涉及醫藥領域,具體涉及一種具有改善貧血功能的竹筍提取物復合制劑及其制備方法。

背景技術:

竹筍是禾本科多年生植物竹子的嫩莖,具有生長旺盛的特點,是綠色無污染植物??晒┦秤玫闹窆S品種主要有毛竹筍、淡竹筍、慈竹筍等;竹筍肉質鮮嫩,松脆,味道鮮美,是我國的傳統佳肴,到目前為止已有2500多年的食用史。竹筍營養豐富,文獻報導竹筍含有鐵、鈣、磷等多種礦物質營養元素和維生素,以及各種蛋白質。蛋白質水解后可得到18種氨基酸,而且脂肪含量低(劉明池.竹筍的營養價值與食用方法[J].蔬菜,2002,2:40-40)。竹筍的主要功用在食用方面,也有研究者將其作為原料從中提取竹筍氨基酸肽類用作食品添加劑(專利申請200510025443.7)或提取竹筍甾類醇功能性組分(專利申請200410099219.8)。

本申請人早期研究中公開了竹筍提取物竹胎粉中含有EPO、IL-1β、IL-2等造血因子類似物,微量元素以及多種氨基酸(陳琳,師偉,呂洋,等.竹胎粉輔助卟啉鐵改善營養性貧血的療效觀察[J].營養學報2006,28(3):233-235),首次提出了竹胎粉輔助卟啉鐵復合制劑改善營養性貧血的效果,提供了竹筍提取物的一種新的用途。

血液由血漿和血細胞組成,血漿中含有機體新陳代謝所需要的蛋白質、電解質等各種重要的營養物質。失血性貧血常造成血細胞減少以及血漿中營養物質的丟失,所以采用竹筍提取物復合制劑治療失血性貧血是一個好的思路。

本申請人在研究階段已提出了專利申請200610066207.4,說明了含有竹胎粉的改善貧血的保健品及其制備方法。然而在向產業化推進過程中,發現原有制備工藝上存在一些缺陷,如制備竹胎水時采用多次膜過濾以及反復凍融,工藝繁瑣,不僅提高了生產成本,工業化生產時難以實施。因此,需要提出更具有產業利用價值的竹胎提取物保健品和制備工藝。

發明內容:

本發明的主要目的在于提供一種可產業實施的改善營養性貧血的竹筍提取物及其復合制劑。

本發明具有改善貧血功能竹筍提取物復合制劑,由竹筍提取物、補鐵劑及其它助劑配制而成,其中:所述竹筍提取物是固形物、提取液或干粉,所述補鐵劑為鐵卟啉或血紅素鐵,所述竹筍提取物與補鐵劑的重量比為400~800∶1。

所述竹筍提取物復合制劑,其中竹筍提取物中游離總氨基酸含量不低于質量百分比3.75%。

所述竹筍提取物復合制劑,所述竹筍提取物分別按以下方法獲得:

固形物:將粉碎之后的鮮竹筍加入多功能提取罐中,加入竹筍6倍重量的純化水回流提取,共提取兩次,合并提取液,減壓濃縮至4g竹筍/ml,將濃溶液轉移至醇沉罐中,加入等體積的95%乙醇,靜置,取上清液,減壓濃縮,真空干燥,得到竹筍提取物固形物;

提取液:筍干粉碎至過200目篩,加入20倍的水熱回流提取,提取多,收集餾出液得到竹筍提取液;

粉料:是將所述提取液在150℃噴霧干燥得到。

所述竹筍提取物復合制劑,為口服液,所述其它助劑包括食品級的調味劑、助懸劑、抑菌劑等輔助功能的組分;具體選自阿斯巴甜、AK糖、檸檬酸羧、甲基纖維素鈉、黃原膠、紅牛香精、尼泊金乙酯中的一種或多種。

所述竹筍提取物復合制劑為口服液,按以下組分混合并用去離子水定容:

所述竹筍提取物復合制劑為片劑,按以下組分混合形成片芯:

所述竹筍提取物復合制劑為膠囊,按以下組分混合形成:

本發明的另一目的在于提供上述竹筍提取物復合制劑中活性成分竹筍提取物的制備方法。

其中,固形物:將粉碎之后的鮮竹筍加入多功能提取罐中,加入竹筍6倍重量的純化水回流提取,共提取兩次,合并提取液,減壓濃縮至4g竹筍/ml,將濃溶液轉移至醇沉罐中,加入等體積的95%乙醇,靜置,取上清液,減壓濃縮,真空干燥,得到竹筍提取物固形物;

提取液:筍干粉碎至過200目篩,加入20倍的水熱回流提取,提取多,收集餾出液得到竹筍提取液;

粉料:是將所述提取液在150℃噴霧干燥得到。

以上所述方法獲得的竹筍提取物也是本發明的技術內容,所述竹筍提取物中游離總氨基酸含量不低于質量百分比3.75%。

該竹筍提取物在制備抗貧血藥物或保健品中的應用也是本發明的技術內容。

采用以上設計,本發明復合制劑中竹筍提取物含有豐富的葡萄糖、蛋白質以及多種元素,能夠刺激造血,擴充血容量,其復合鐵制劑對失血性貧血的恢復有更好促進作用。采用本發明的方法制備竹筍提取物,工藝簡單實用,并可以很好地保留竹筍原料中的各種有益成分,適于工業化生產。

附圖說明:

圖1為本發明中竹筍提取物的氨基酸分析圖譜。

圖2為本發明竹筍提取物復合制劑對失血性貧血小鼠血紅蛋白的影響。

具體實施方式:

本發明竹筍提取物復合制劑,是由竹筍提取物、補鐵劑、其它助劑以及基料配制而成。其中:

本發明竹筍提取物的獲取從便于產業化的思路來考慮,因此,可以是便于保管與儲運的固形物,可以是固形物、提取液或干粉,可由新鮮竹筍或由筍干用水提并進一步加工取得,以下再詳述制備過程。

補鐵劑為鐵卟啉或血紅素鐵,其中鐵卟啉又稱葉綠素鐵鈉鹽,為天然植物提取物,是已有的具有補血功效的補鐵劑;血紅素鐵屬天然有機鐵,是人體內重要的組成物質,為已有的安全無毒的補鐵劑。

其它助劑包括食品級的調味劑、助懸劑、抑菌劑等輔助功能的組分;如阿斯巴甜、AK糖、檸檬酸羧、甲基纖維素鈉、黃原膠、紅牛香精、尼泊金乙酯。

基料包括水或淀粉等適應不同劑型的基質材料。

以下通過具體實例說明本發明竹筍提取物復合制劑及其制備過程。

制備例1、竹筍提取物固形物的制備

將粉碎之后的1000g鮮竹筍加入多功能提取罐中,加入竹筍6倍重量的純化水回流提取,共提取2次,合并2次提取液,減壓濃縮,至4g竹筍/ml,將濃溶液轉移至醇沉罐中,加入等體積的95%乙醇,靜置,取上清液,減壓濃縮,真空干燥,得到竹筍提取物固形物100g,提取收率為10%。

竹筍提取物的質檢標準:游離氨基酸含量不低于3.75%(質量百分比)。

參照GBT8314《茶游離氨基酸總量測定》標準檢測竹筍提取物中的氨基酸含量,結果:含量4.12%。

制備例2、竹筍提取液的制備

取黃竹筍干100g,粉碎至過篩(200目),加入2000ml的去離子水,熱回流提取,提取3次,合并全部提取液;繼續回流蒸餾40min,收集餾出液得到竹筍提取物11ml。

竹筍提取液的質檢標準同制備例1。用與制備例1相同的方法檢測,本例提取液中的氨基酸含量為3.9%,達到質檢要求。

制備例3、竹筍提取物粉料的制備

采用與制備例2相同的方法獲得1L符合質檢要求的竹筍提取液,提取液在150℃噴霧干燥,得到黃色粉狀提取物196g;竹筍提取物粉料總收率為19.6%。

竹筍提取物粉料的質檢標準同制備例1。用與制備例1相同的方法檢測,本例提取物粉料中的氨基酸含量為3.89%,達到質檢要求。

以下以多個劑型制備例來說明以上竹筍提取物的使用。劑型制備例為正交實驗的優化結果。正交實驗中:氯化血紅素鐵的用量按藥品劑量標準設定,以大鼠缺鐵性貧血模型對大鼠缺鐵性貧血的療效(方法參見功能驗證之三)來優化竹筍提取物和氯化血紅素鐵的配比,結果竹筍提取物和氯化血紅素鐵比例在400~800∶1的情況下效果較好,低于400時療效不夠,超過800時,不僅提高了口服液的制備成本和生產難度,且口服液的穩定性會差些。

另外,劑型制備例中,各種輔料是按照制劑學知識進行調配并優化,例如制備例4中的調味劑的種類和用量以人體感觀(口感)評價確定;助懸劑的種類和用量以穩定性指標來確定;抑菌劑的種類和用量依據衛生學來確定。正交實驗的過程略過。

制備例4、含有竹筍提取物口服液的制備

按照上述正交實驗,獲得優化結果的一個配方如下:

以1000ml產品計,口服液其一配方如下,其中竹筍提取物為制備例1的產物,使用時將固形物粉碎即可。

配制過程:

1.原料、輔料檢驗按照各自質量標準進行檢驗。檢驗合格之后的原輔料方可投入生產;

2.稱取竹筍提取物、AK糖,加入約4倍量的水,加熱、攪拌使溶解;濾過,備用;

3.稱取羧甲基纖維素鈉、黃原膠,加適量乙醇潤濕,加水配制為0.5%的溶液,加熱,攪拌,靜置,備用;

4.稱取血紅素鐵,加入預先配制好的100倍體積的0.5%的NaOH溶液,加熱,攪拌使充分溶解;

5.稱取尼泊金乙酯,配制為5%的乙醇溶液,備用;

6.在加熱并攪拌之下,將助懸劑溶液加入竹筍提取物溶液當中,充分攪拌,使混合均勻;

7.在加熱并攪拌之下,將竹筍提取物溶液加入血紅素鐵溶液中,充分攪拌,使混合均勻;

8.加入尼泊金乙酯溶液、香精;

9.用檸檬酸調節pH至7.5;

10.用水調節液體至全量;

11.灌裝,每支25ml;

12.流通蒸汽滅菌30min;

13.包裝。

本例制備得到的1000ml液體可按400支分裝得到最終產品口服液。

按照上述原料比例和配制過程,將竹筍提取物使用量加大,最大可以提升至80g,均可以得到療效明顯以及穩定的口服液產品,在此不再一一羅列。

制備例5、含有竹筍提取物片劑的制備

以制備200克片芯計,采用以下配方:

制法:按照上述制劑配方,稱取制備例3得到的竹筍提取物粉體,加入鐵卟啉、微晶纖維素、乳糖以及羥丙基纖維素,以95%乙醇制粒,60℃干燥,整粒;加入其余輔料混合均勻后壓片,制成1000片;包薄膜衣,包裝,即得。

制備例6、含有竹筍提取物口服液的制備

制備10000ml口服液制劑處方:

制法:按照制劑處方取得各組分原料,其中竹筍提取液為用制備例2方法得到的提取液,將各原料混合均勻,煮沸,放置,濾過,分裝成1000支,每支10ml,滅菌,即得。

制備例7、含有竹筍提取物膠囊劑的制備

以制備400克芯料計,制劑處方如下:

制法:按照上述制劑處方稱取各組分原料,其中竹筍提取物為制備例3得到的粉體;所有原料過80目篩,混勻,直接裝膠囊,制成1000粒,包裝,即得。

制備例8、含有竹筍提取物藥用制劑的制備

將70ml制備例2的竹筍提取物和1ml的鐵卟啉水溶液(濃度為0.15g/ml)、10ml蜂蜜混合,加水至100ml混合均勻,得到含有竹筍提取物藥用制劑。

制備例9:含有竹筍提取物飲料的制備

以制備10L飲料計,容器中加入2g的竹筍提取物(制備例1的產物,粉碎)、0.1g的鐵卟啉,10ml的蜂蜜,混合后用水稀釋定容至10L,混勻直接裝罐(500ml)得到功能性飲料。

以上制備例中,如無特殊說明,氯化血紅素鐵、鐵卟啉(海寧風鳴葉綠素有限公司產品,鐵含量為3.72%)以及其余助劑均為商購。

本發明分別對上述制備例的產物進行以下檢測或功能驗證:

一、竹筍提取物功效成分檢測

以制備例1和制備例2的產物為檢測樣品,采用醫用生化分析儀測定葡萄糖,總蛋白,宏量元素鈉、氯、鎂、鉀、鈣、磷的濃度;用ICTMS檢測微量元素鐵、鋅、銅、錳、鈷、釩、鎳、鉬、鉻、鈦、鍺的濃度;采用酸水解和堿水解法,用HP1100色譜儀分析氨基酸組成和含量。結果參見表1至表3以及圖1。

表1葡萄糖和總蛋白檢測

表2宏量元素檢測

表3微量元素檢測

圖1顯示,本發明制備得到的竹筍提取物,其中游離總氨基酸質量百分比高于3.75%。本實驗說明:本發明制備得到的竹筍提取物含有葡萄糖、蛋白質,參與電解質形成的鈉、鈣、鉀、氯、磷、鎂等宏量元素,刺激或參與造血的鐵、鋅、銅、錳、鈦等微量元素,以及在體內參與多種酶的表達、合成和分泌并影響各消化腺、有助于胃腸功能改善的酶活性,還可以促進非鐵卟啉等營養物質和多種氨基酸等營養成分的吸收。本發明制備竹筍提取物的工藝簡單實用,并可以很好地保留竹筍原料中的各種有益成分。

二、竹筍提取物對造血干細胞的調控作用驗證

將CD34+細胞加入含有50μg/L?rhSCF、10μg/L?rhIL-3、10μg/L?1rhIL-6、2U/mlEPO和20μg/L?rhFL的IMDM培養基中,接種于24孔板(2.0×105/孔),細胞密度為1.0×104/ml,每孔1ml培養體系。試驗組中加入5ug/ml的竹筍提取物(制備例1的產物,粉碎水溶)。對照組未加竹筍提取物。每組三孔。24孔板置于37℃、5%CO2孵箱中培養12天。12天后取細胞計數,結果參見表4:

表4:細胞計數

??總有核細胞增殖倍數 ?CD34+細胞數增殖倍數 ??對照組 ??72.1±3.5 ?9.1±0.9 ??試驗組 ??58.2±8.6 ?6.8±1.1

該實驗結果顯示,竹筍提取物能夠促進有核細胞的增殖,與對照組相比竹筍提取物能夠顯著擴增CD34+細胞的數量。

三、竹筍提取物藥用制劑對失血性貧血小鼠療效實驗

1、失血性貧血小鼠模型建立:對文獻(失血性血虛癥模型[M]//苗明三.實驗動物和動物實驗技術.(第1版)北京:中國中醫藥出版社,(1997年出版)290-291)介紹的失血型血虛模型加以改進,通過對小鼠少量多次放血,達到貧血狀態,以模擬臨床失血性貧血。Balb/C小鼠按體重隨機分3組,每組8只,均給予正常飲食,以毛細管刺入小鼠內眥靜脈叢,按25ml/kg體重失血,連續放血2d,失血量占小鼠血容量的40%-45%,血紅蛋白、紅細胞數、紅細胞壓積均低于正常值下限,分別為12.2g/dl、7.7×106/μl、41.5%,建立失血性貧血動物模型。

2、實驗方法:實驗小鼠失血后立刻灌胃給藥,按25ml/kg體重,1次/d,連續給藥5d,分別給予陽性對照制劑(0.15%鐵卟啉、10%蜂蜜)、藥物制劑(本發明制備例8的產物即70%竹筍提取物、0.15%鐵卟啉、10%蜂蜜)及陰性對照去離子水,分別于給藥0h、18h、42h、67h、90h從小鼠尾靜脈取血,以4%EDTA-K2抗凝,血細胞計數儀測定血紅蛋白、紅細胞、紅細胞壓積。給藥0h為失血前對照。

3、實驗結果:參見表5、表6和圖2所示。

表5.竹筍提取物復合制劑對失血性貧血小鼠紅細胞的影響(n=8)

*與陰性對照組相比t=-2.86?P<0.05;**陽性對照組與陰性對照組相比t=3.52,藥物組與陰性對照組相比t=-8.34,P<0.01;

△陽性對照組與藥物組相比t=-3.03,P<0.05;

陽性對照組與陰性對照組相比,t=-3.89,藥物組與陰性對照組相比t=-3.89,P<0.01

表6竹筍提取物復合制劑對失血性貧血小鼠紅細胞壓積的影響(n=8)

*與陰性對照組相比t=-3.12?P<0.05;**陽性對照組與陰性對照組相比t=4.75,藥物組與陰性對照組相比t=-4.20,P<0.01;

△陽性對照組與藥物組相比t=-2.91,P<0.05;

陽性對照組與陰性對照組相比t=4.94,藥物組與陰性對照組相比t=-5.76,P<0.01

本實驗通過組間比較顯示:給予竹筍提取物復合制劑(藥物組)的小鼠在失血后42h血紅蛋白、紅細胞數、紅細胞壓積高于陰性對照組;失血67h,陽性對照組和藥物組的小鼠,其血紅蛋白、紅細胞數、紅細胞壓積均高于陰性對照組(p<0.01),且兩組間差異有統計學意義;失血90h,兩組與陰性對照組相比差異有非常顯著意義。表明藥物組和陽性對照組對失血性貧血的恢復均有一定的作用,且藥物組療效好于陽性對照組。由此表明竹筍提取物中多種營養成分的協同作用,能夠刺激造血,擴充血容量。

該實驗中由于小鼠失血量達40%左右,可能造成造血原料鐵的丟失,因此本發明補充了鐵劑;因此本發明復合制劑能夠更好地促進失血性貧血小鼠的恢復。

參見圖2所示,其中制劑1為陽性對照制劑,制劑2為藥物制劑,對照為陰性對照;圖2顯示竹筍提取液組具有最好的促進失血性貧血小鼠血紅蛋白恢復的作用。

四、竹筍提取物液口服制劑治療缺鐵性貧血實驗

1、臨床資料

一般資料:選經診斷為缺鐵性貧血的成人患者60例,年齡在18~65歲。采取雙盲隨機分組,組間和自身兩種對照設計。將60例缺鐵性貧血患者,按性別、年齡、紅細胞數(RBC)、血紅蛋白(HB)、紅細胞壓積(HCT)、紅細胞游離原卟啉等均衡地分為2組,每組30例,然后隨機分為觀察組和對照組。用藥前尿常規檢查(尿糖、尿膽紅素、尿酮體、尿潛血、尿蛋白、尿膽原、尿白細胞)受試者均在正常范圍。用藥前兩組患者性別、年齡、紅細胞數(RBC)、血紅蛋白(HB)、紅細胞壓積(HCT)、紅細胞游離原卟啉均無明顯差異,具有可比性。

納入標準:經檢查血紅蛋白<120g/L的缺鐵性貧血患者,且病人自愿參加并保證配合者,均可納入試驗。

排除標準:年齡在18歲以下或65歲以上者,妊娠或哺乳期婦女,其他器質性疾病或精神病患者。未按規定服用受試物的受試者,資料不全影響功效或安全性評價者。

2、方法

按完全隨機雙盲法分為實驗組和對照組。給實驗組連續食用竹筍提取物液口服液(制備例4的產品),并給對照組食用外觀口感與之相同的安慰劑,每天2次,每次1瓶(25ml),觀察期為40d。試食期間對受試對象的生活和飲食不加干預,但避免應用其它含鐵制劑。

3、試驗結果

實驗組與對照組試驗前后Hb(血紅蛋白)、FEP(紅細胞內游離原卟啉)和SF(血清鐵蛋白)的結果比較件表7。

表7

**試驗前后自身配對t檢驗,P<0.01;##試驗后實驗組與對照組t檢驗,P<0.01;*試驗前后自身配對t檢驗,P<0.05。

4、結論

實驗結果表明,實驗組60名患有營養性貧血的受試者,在連續食用竹筍提取物液口服液40d后,各項有關血液指標有明顯改善。血紅蛋白的含量平均升高、紅細胞內游離原卟啉明顯下降和實驗后血清鐵蛋白的含量有所升高。實驗組改善營養性貧血的總有效率達78%。結果表明,竹筍提取物液口服液對營養性貧血具有明顯的改善作用。

該實驗還得出本發明竹筍提取物復合制劑的口服劑量可為50ml/天·人。如用作保健輔助治療,劑量酌減。

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具有 改善 貧血 功能 竹筍 提取物 及其 制備 方法 以及 復合 制劑
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