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一種制備紅景天苷的方法.pdf

摘要
申請專利號:

CN201010518244.0

申請日:

20101019

公開號:

CN101974045B

公開日:

20131120

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:

IPC分類號:

C07H15/18,C07H1/08

主分類號:

C07H15/18,C07H1/08

申請人:

康美藥業股份有限公司

發明人:

閔建華,許冬瑾,向飛軍,吳曉東,陳華師

地址:

515300 廣東省揭陽市普寧市長春路

優先權:

CN201010518244A

專利代理機構:

北京泛華偉業知識產權代理有限公司

代理人:

劉丹妮

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內容摘要

本發明提供了一種制備紅景天苷的方法。本發明提供的制備紅景天苷的方法包括以下步驟:1)提?。喝〈蠡t景天藥材,加水微波提取,濾過,濃縮,得濃縮液;2)純化:將步驟1)所得濃縮液進行二次醇沉,得濾液;和3)精制:將步驟2)所得濾液上大孔樹脂,洗脫,濃縮,干燥,即得。本發明提供的制備方法具有提取效率高、工藝簡單、可用于工業大生產等優點。

權利要求書

1.一種制備紅景天苷的方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:?1)提?。喝〈蠡t景天藥材,加水微波提取,濾過,濃縮,得濃縮液,其中微波提取每次加10倍量的水,微波功率462W,提取三次,每次提取1.5分鐘;?2)純化:將步驟1)所得濃縮液進行二次醇沉,得濾液;和?3)精制:將步驟2)所得濾液上大孔樹脂,洗脫,濃縮,干燥,即得。?2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟1)中大花紅景天藥材為50~80目的粉末。?3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,大花紅景天藥材為50目的粉末。?4.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,所述步驟1)中微波提取之前,還包括采用水浸泡大花紅景天藥材的步驟。?5.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,所述浸泡時間為0.5~3小時。?6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述浸泡時間為1.5小時。?7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟2)中二次醇沉的乙醇含量分別為:第一次60~70%;第二次80~90%。?8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟2)中第一次醇沉的乙醇含量為60%。?9.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟2)中第二次醇沉的乙醇含量為85%。?10.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述二次醇沉的時間分別為12~48小時。?11.根據權利要求10所述的方法,其特征在于,第一次醇沉時間為48小時,第二次醇沉時間為24小時。?12.根據權利要求1-6和8-11中任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟2)所得濾液在精制之前,還包括加堿調節pH值的步驟。?13.根據權利要求12所述的方法,其特征在于,所述pH值為pH8~?10。?14.根據權利要求13所述的方法,其特征在于,所述pH值為8。?15.根據權利要求13所述的方法,其特征在于,所述調pH值后還包括于2~8℃下靜置的步驟,所述靜置的時間為12~48小時。?16.根據權利要求15所述的方法,其特征在于,所述靜置的時間為24小時。?17.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟2)所得濾液在精制之前,還包括加堿調節pH值的步驟。?18.根據權利要求17所述的方法,其特征在于,所述pH值為pH8~10。?19.根據權利要求18所述的方法,其特征在于,所述pH值為8。?20.根據權利要求18所述的方法,其特征在于,所述調pH值后還包括于2~8℃下靜置的步驟,所述靜置的時間為12~48小時。?21.根據權利要求20所述的方法,其特征在于,所述靜置的時間為24小時。?22.根據權利要求1-6,8-11及13-21中任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中所使用的大孔樹脂選自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8。?23.根據權利要求22所述的方法,其特征在于,所述的大孔樹脂為SP825。?24.根據權利要求22所述的方法,其特征在于,所述樹脂與大花紅景天藥材的重量比為1:0.5以上。?25.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中所使用的大孔樹脂選自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8。?26.根據權利要求25所述的方法,其特征在于,所述的大孔樹脂為SP825。?27.根據權利要求25所述的方法,其特征在于,所述樹脂與大花紅景天藥材的重量比為1:0.5以上。?28.根據權利要求12所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中所使用的大孔樹脂選自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8。?29.根據權利要求28所述的方法,其特征在于,所述的大孔樹脂為SP825。?30.根據權利要求28所述的方法,其特征在于,所述樹脂與大花紅景天藥材的重量比為1:0.5以上。?31.根據權利要求1-6,8-11,13-21及23-30中任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的操作如下:先用水洗脫至洗脫液近無色,再用5%乙醇洗脫,最后用10%乙醇洗脫,再合并各洗脫液并濃縮。?32.根據權利要求31所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為1~9BV。?33.根據權利要求32所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為3BV。?34.根據權利要求31所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為2~10BV。?35.根據權利要求34所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為10BV。?36.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的操作如下:先用水洗脫至洗脫液近無色,再用5%乙醇洗脫,最后用10%乙醇洗脫,再合并各洗脫液并濃縮。?37.根據權利要求36所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為1~9BV。?38.根據權利要求37所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為3BV。?39.根據權利要求36所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為2~10BV。?40.根據權利要求39所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為10BV。?41.根據權利要求12所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的操作如下:先用水洗脫至洗脫液近無色,再用5%乙醇洗脫,最后用10%乙醇洗脫,再合并各洗脫液并濃縮。?42.根據權利要求41所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為1~9BV。?43.根據權利要求42所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為3BV。?44.根據權利要求41所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為2~10BV。?45.根據權利要求44所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為10BV。?46.根據權利要求22所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的操作如下:先用水洗脫至洗脫液近無色,再用5%乙醇洗脫,最后用10%乙醇洗脫,再合并各洗脫液并濃縮。?47.根據權利要求46所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為1~9BV。?48.根據權利要求47所述的方法,其特征在于,所述5%乙醇洗脫的用量為3BV。?49.根據權利要求46所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為2~10BV。?50.根據權利要求49所述的方法,其特征在于,所述10%乙醇洗脫的用量為10BV。?51.根據權利要求1-6,8-11,13-21,23-30及32-50中任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為0.5~1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1:10~1:30,上柱流速為2~4BV/h。?52.根據權利要求51所述的方法,其特征在于,步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1:30,上柱流速為2BV/h。?53.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為0.5~1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1:10~1:30,上柱流速為2~4BV/h。?54.根據權利要求53所述的方法,其特征在于,步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1:30,上柱流速為2BV/h。?55.根據權利要求12所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為0.5~1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比?為1:10~1:30,上柱流速為2~4BV/h。?56.根據權利要求55所述的方法,其特征在于,步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1:30,上柱流速為2BV/h。?57.根據權利要求22所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為0.5~1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1:10~1:30,上柱流速為2~4BV/h。?58.根據權利要求57所述的方法,其特征在于,步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1:30,上柱流速為2BV/h。?59.根據權利要求1-6,8-11,13-21,23-30,32-50及52-58中任一項所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:?1)提?。喝〈蠡t景天藥材,粉碎成為50目的粉末,加水浸泡1.5小時,微波462W功率提取3次,合并提取液,濃縮,得20℃下相對密度為1.00~1.10的濃縮液;?2)純化:加乙醇使步驟1)所得濃縮液中乙醇含量達到60%,2~8℃下靜置48小時,過濾,濾液再加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃下靜置24小時,過濾,濾液加堿調節pH值為pH8,2~8℃下靜置24小時,過濾,得濾液;?3)精制:將步驟2)所得濾液濃縮至1.5g/ml的上樣濃度,以2BV/h的流速上SP825型大孔樹脂柱,先用水沖洗至洗脫液近無色,再用3BV的5%乙醇進行洗脫,最后用10BV的10%乙醇進行洗脫,收集洗脫液,合并,濃縮,濃縮液繼續上SP825型大孔樹脂柱洗脫,反復2~3次,即得。?60.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:?1)提?。喝〈蠡t景天藥材,粉碎成為50目的粉末,加水浸泡1.5小時,微波462W功率提取3次,合并提取液,濃縮,得20℃下相對密度為1.00~1.10的濃縮液;?2)純化:加乙醇使步驟1)所得濃縮液中乙醇含量達到60%,2~8℃下靜置48小時,過濾,濾液再加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃下靜置24小時,過濾,濾液加堿調節pH值為pH8,2~8℃下靜置24小時,過濾,?得濾液;?3)精制:將步驟2)所得濾液濃縮至1.5g/ml的上樣濃度,以2BV/h的流速上SP825型大孔樹脂柱,先用水沖洗至洗脫液近無色,再用3BV的5%乙醇進行洗脫,最后用10BV的10%乙醇進行洗脫,收集洗脫液,合并,濃縮,濃縮液繼續上SP825型大孔樹脂柱洗脫,反復2~3次,即得。?61.根據權利要求22所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:?1)提?。喝〈蠡t景天藥材,粉碎成為50目的粉末,加水浸泡1.5小時,微波462W功率提取3次,合并提取液,濃縮,得20℃下相對密度為1.00~1.10的濃縮液;?2)純化:加乙醇使步驟1)所得濃縮液中乙醇含量達到60%,2~8℃下靜置48小時,過濾,濾液再加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃下靜置24小時,過濾,濾液加堿調節pH值為pH8,2~8℃下靜置24小時,過濾,得濾液;?3)精制:將步驟2)所得濾液濃縮至1.5g/ml的上樣濃度,以2BV/h的流速上SP825型大孔樹脂柱,先用水沖洗至洗脫液近無色,再用3BV的5%乙醇進行洗脫,最后用10BV的10%乙醇進行洗脫,收集洗脫液,合并,濃縮,濃縮液繼續上SP825型大孔樹脂柱洗脫,反復2~3次,即得。?62.根據權利要求31所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:?1)提?。喝〈蠡t景天藥材,粉碎成為50目的粉末,加水浸泡1.5小時,微波462W功率提取3次,合并提取液,濃縮,得20℃下相對密度為1.00~1.10的濃縮液;?2)純化:加乙醇使步驟1)所得濃縮液中乙醇含量達到60%,2~8℃下靜置48小時,過濾,濾液再加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃下靜置24小時,過濾,濾液加堿調節pH值為pH8,2~8℃下靜置24小時,過濾,得濾液;?3)精制:將步驟2)所得濾液濃縮至1.5g/ml的上樣濃度,以2BV/h的流速上SP825型大孔樹脂柱,先用水沖洗至洗脫液近無色,再用3BV的5%乙醇進行洗脫,最后用10BV的10%乙醇進行洗脫,收集洗脫液,?合并,濃縮,濃縮液繼續上SP825型大孔樹脂柱洗脫,反復2~3次,即得。?63.根據權利要求51所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:?1)提?。喝〈蠡t景天藥材,粉碎成為50目的粉末,加水浸泡1.5小時,微波462W功率提取3次,合并提取液,濃縮,得20℃下相對密度為1.00~1.10的濃縮液;?2)純化:加乙醇使步驟1)所得濃縮液中乙醇含量達到60%,2~8℃下靜置48小時,過濾,濾液再加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃下靜置24小時,過濾,濾液加堿調節pH值為pH8,2~8℃下靜置24小時,過濾,得濾液;?3)精制:將步驟2)所得濾液濃縮至1.5g/ml的上樣濃度,以2BV/h的流速上SP825型大孔樹脂柱,先用水沖洗至洗脫液近無色,再用3BV的5%乙醇進行洗脫,最后用10BV的10%乙醇進行洗脫,收集洗脫液,合并,濃縮,濃縮液繼續上SP825型大孔樹脂柱洗脫,反復2~3次,即得。?

說明書

技術領域

本發明涉及一種制備紅景天苷的方法。

背景技術

本發明所用藥材為大花紅景天,來源于景天科紅景天屬植物大花紅景天(拉丁名:Rhodiola?crenulata(Hook.f.et?Thoms.)H.Ohba)的根或者根莖的主要活性成分是紅景天苷。大花紅景天主產于西藏、云南西北部、四川西部,生于海拔2800~5600米的山坡草地、灌叢中,能在惡劣而多變的自然環境中生長,是一種適應性很強的植物。傳統醫學認為大花紅景天能益氣活血,通脈平喘,用于氣虛血淤,胸痹心痛,中風偏癱,倦怠氣喘。大花紅景天中主要含有苷類、黃酮類、多糖類、鞣質、揮發油等,紅景天苷為其主要活性成分,也是治療心腦血管疾病的主要成分之一,具有預防和抗癡呆作用,抗缺氧作用,延緩衰老作用,抑制快速型室性心律失常,臨床上用來治療冠心病、高原低血壓癥、高原性紅細胞增多癥。毒性試驗表明,紅景天苷毒性甚?。杭t景天苷1g/Kg小鼠皮下注射,未見毒性反應。

近年來,隨著人們生活水平的提高,加上人口結構的老齡化,心血管疾病的發病率呈逐年上升的趨勢,開發治療效果較好的心腦血管疾病的藥物已經成為當今藥物研究的熱點,臨床研究報道顯示:高純度單一成分的紅景天苷在治療心腦血管方面具有良好的應用前景。

目前紅景天苷的制備方法較多,邰韌輝等(“高純度紅景天苷的制備工藝研究”,現代中藥研究與實踐,2004,18(4):58)用溶劑萃取結合大孔樹脂分離,然后用硅膠柱精制。用該方法制得的紅景天苷含量低,且成本高,不適合工業化大生產。丁朝武等(“紅景天苷和紅景天苷元標準品的制備方法研究”,分析測試學報,1997,16(1):38)用化學和高效液相制備色譜方法分離制備,所得的產品純度高,但高效液相色譜制備量小,無法大規模生產。葛永潮等(“紅景天苷的制備工藝改進”,中國藥物化學雜志,1994,4(3):196)將聚酰胺、反相大孔樹脂、硅膠及葡聚糖凝膠四種柱層析組合使用,來制備紅景天苷,此方法分離介質品種較多,且成本較高,不適合工業化大生產。

因此,還有待開發一種工藝簡單、成本低、純度高、適合工業化生產的制備紅景天苷的方法。

發明內容

因此,本發明的目的是提供一種新的制備紅景天苷的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的。本發明提供了一種制備紅景天苷的方法,所述方法包括以下步驟:1)提?。喝〈蠡t景天藥材,加水微波提取,濾過,濃縮,得濃縮液;2)純化:將步驟1)所得濃縮液進行二次醇沉,得濾液;和3)精制:將步驟2)所得濾液上大孔樹脂,洗脫,濃縮,干燥,即得。

優選地,所述步驟1)中大花紅景天藥材為50~80目的粉末,優選為50目的粉末。

優選地,所述步驟1)中微波提取之前,還包括采用水浸泡大花紅景天藥材的步驟;更優選地,所述浸泡時間為0.5~3小時,優選為1.5小時。

優選地,所述步驟1)中微波提取的功率為119~700w,優選為462w。

優選地,所述步驟1)中微波提取的次數為3次。

優選地,所述微波提取的時間為90秒。

優選地,所述微波提取的水用量為20倍。

優選地,所述步驟2)中二次醇沉的乙醇含量分別為:第一次60~70%,優選60%;第二次80~90%,優選85%;更優選地,所述二次醇沉的時間分別為12~48小時,優選第一次醇沉時間為48小時,第二次醇沉時間為24小時。

優選地,所述步驟2)所得濾液在精制之前,還包括加堿調節pH值的步驟。

優選地,所述pH值為pH?8~10,優選為pH?8;更優選地,所述調pH值后還包括于2~8℃下靜置的步驟,所述靜置的時間為12~48小時,優選為24小時。

優選地,所述步驟3)中所使用的大孔樹脂選自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8中的一種或多種,優選為SP825。

優選地,所述樹脂與大花紅景天藥材的重量比為1∶0.5以上。

優選地,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的操作如下:先用水洗脫至洗脫液近無色,再用5%乙醇洗脫,最后用10%乙醇洗脫,再合并各洗脫液并濃縮;更優選地,所述5%乙醇洗脫的用量為1~9BV,優選為3BV;所述10%乙醇洗脫的用量為2~10BV,優選為10BV。

優選地,所述步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為0.5~1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1∶10~1∶30,上柱流速為2~4BV/h;優選地,步驟3)中洗脫大孔樹脂的條件如下:上柱濾液濃度為1.5g/ml,大孔樹脂的徑高比為1∶30,上柱流速為2BV/h。

在一個優選實施方案中,本發明提供的方法包括以下步驟:

1)提?。喝〈蠡t景天藥材,粉碎成50~80目的粉末,優選為50目的粉末,加水浸泡0.5~3小時,優選為1.5小時,微波119~700w,優選為462w功率提取,優選提取3次,合并提取液,濃縮,得20℃下相對密度為1.00~1.10的濃縮液;

2)純化:加乙醇使步驟1)所得濃縮液中乙醇含量達到60~70%,優選為60%,2~8℃下靜置12~48小時,優選為48小時,過濾,濾液再加乙醇使含醇量達到80~90%,優選為85%,2~8℃下靜置12~48小時,優選為24小時,過濾,濾液加堿調節pH值為pH?8~10,優選為pH8,2~8℃下靜置12~48小時,優選為24小時,過濾,得濾液;

3)精制:將步驟2)所得濾液濃縮至0.5~1.5g/ml的上樣濃度,優選為1.5g/ml的上樣濃度,以2~4BV/h的流速上SP825型大孔樹脂柱,優選為2BV/h,先用水沖洗至洗脫液近無色,再用1~9BV,優選為3BV的5%乙醇進行洗脫,最后用2~10BV,優選為10BV的10%乙醇進行洗脫,收集洗脫液,合并,濃縮,濃縮液繼續上SP825型大孔樹脂柱洗脫,反復2~3次,即得。

此外,本發明還提供了上述的方法制備的紅景天苷或者包含上述方法制備的紅景天苷的藥物組合物。

與現有技術相比,本發明提供的制備紅景天苷的方法至少具有以下幾方面的優點和有益效果:

1)微波提取,紅景天苷的提取效率較高,工藝過程較為簡單,且提取時間短;

2)純化和精制工藝過程簡單,得到的紅景天苷單體純度較高,并且精制工藝中的大孔樹脂柱可以反復應用,后處理簡單,成本較低,適用于工業化大生產;

3)整個制備工藝過程中只用到乙醇和水,無其它有機溶劑,比較安全,所制備的紅景天苷可用于藥品生產;

4)提取溶劑僅為水,與使用高濃度乙醇的提取方法相比,成本較低;

5)紅景天苷的得率較高,可以提高資源利用率,節約資源。

6)得到的紅景天苷純度較高,可直接用作注射劑的原料。

可見,本發明提供了一種新的制備紅景天苷的方法,可以提高紅景天苷的收率,節省資源,制備得到的高純度紅景天苷,可以用作注射劑等劑型的原料藥,據此可以開發出一種速效的、純度較高、高生物利用度、治療心腦血管疾病的藥物。

具體實施方式

以下參照具體的實施例來說明本發明。本領域技術人員能夠理解,這些實施例僅用于說明本發明,其不以任何方式限制本發明的范圍。

以下各實施例中,紅景天苷的含量依據《中國藥典》2010版一部中規定的HPLC方法測定。

以下各實施例中使用的原料大花紅景天藥材(購自普寧中藥材市場),測定紅景天藥材中紅景天苷含量為0.51%(按干品計),符合藥典規定的紅景天藥材中紅景天苷含量不得低于0.5%(按干品計)的規定,認為該藥材合格。

實施例1對大花紅景天的提取工藝的研究

本實施例對大花紅景天提取工藝中的提取方法、提取溶劑、原料粒度、浸泡時間、提取條件等分別進行了研究。

1.提取方法的考察

取過50目篩的大花紅景天藥材3份,每份10g,分別用熱回流提取(每次加10倍量的水,加熱溫度100℃,提取3次,每次提取3小時);超聲波提取(每次加10倍量的水,超聲波頻率45KHz,提取3次,每次提取1小時);微波提取(每次10倍量的水,微波功率462w,提取3次,每次提取1.5分鐘);將提取液過濾,減壓濃縮至相對密度約1.00(20℃時測定),稀釋定容至100ml,測定紅景天苷含量,結果見表1。

表1提取方法考察結果

??提取方法 ??10g藥材中紅景天苷提取量(mg) ??提取率(%) ??微波提取 ??57.439 ??129.12 ??超聲提取 ??40.937 ??92.21 ??熱回流提取 ??33.904 ??76.39

根據表1的結果可見,與其他兩種提取方法相比,微波提取的提取率顯著提高,并且提取時間短,因此選擇微波提取作為紅景天苷的提取方法。

2.提取溶劑的考察

取過50目的大花紅景天藥材5份,每份5g,分別用10倍量的水、20%、40%、60%、80%乙醇作為溶劑,微波提取3次,微波功率462w,每次1分鐘,提取液過濾,減壓濃縮至相對密度約為1.00(20℃時測定),定容至50ml,測定紅景天苷含量。結果見表2。

表2提取溶劑考察結果

由表2的結果可見,80%乙醇對紅景天苷的提取率最高,但在實驗過程中,使用含乙醇的溶劑提取時會產生爆沸現象,且在水沉過程處理時很多的細小的沉淀難以濾除去,給實驗造成一定的負擔,同時用80%乙醇提取成本較高,因此,選擇水作為提取溶劑。

3.微波功率的考察

取過50目的大花紅景天藥材5份,每份5g,分別用不同頻率(低檔、中低檔、中檔、中高檔、高檔)微波提取,加10倍量的水提取3次,每次1分鐘,提取液過濾,減壓濃縮至相對密度約為1.00(20℃時測定),定容至50ml,測定紅景天苷含量。結果見表3。

表3微波功率考察結果

根據表3的結果,選擇中檔(功率462w)作為微波提取的功率。

4.原料粒度的考察

分別取過24、50、65、80目篩的大花紅景天藥材各5g,分別加入10倍的水,微波提取3次,功率462w,每次1分鐘,合并提取液,過濾,減壓濃縮至相對密度約為1.00(20℃時測定),定容至50ml,測定紅景天苷含量,結果見表4。

表4粒度考察結果

從表4可以看出,粒度越細,紅景天苷提取率越高,但實驗時處理越困難,且難以應用于大生產,因此選擇50目做為紅景天原料提取粒度。

5.浸泡時間的考察

分別取7份過50目的大花紅景天藥材5g,在第一次微波提取之前加10倍量的水浸泡,時間依次為0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h,微波提取3次,每次加10倍量水,每次提取時間為1min,合并提取液,過濾,減壓濃縮至相對密度約為1.00(20℃時測定),定容至50ml,測定紅景天苷含量,結果見表5。

表5浸泡時間考察結果

從表5的結果看出,浸泡1.5小時,紅景天苷提取率最高,因此將浸泡時間選擇1.5小時。

6.提取條件的考察

選擇對微波提取紅景天苷影響較大的三個因素即加溶劑量、提取時間、提取次數做正交試驗,分別取9份過50目的大花紅景天藥材2g,浸泡1.5h,按下述安排的條件提取,提取液過濾,減壓濃縮至相對密度約為1.00(20℃時測定),定容至20ml,HPLC法測定含量,用紅景天苷的提取量來做為考察指標,表6A為因素水平表。

表6A提取條件考察的因素水平表

表6B提取條件考察結果

表6C實驗結果方差分析表

從上表可以看出,RC>RB>RA,C因素(提取次數)為影響微波提取紅景天苷最大的因素,其次是B因素(提取時間),A因素的影響最小,方差分析顯示,C因素(提取次數)對紅景天苷的影響具有極顯著性差異,這與紅景天苷的提取率基本一致。

因此,結合實際的工業生產考慮,選擇A2B3C3較為合理,即加20倍量的水,提取3次,每次90秒。

7.三次工藝驗證實驗:

取3份過50目篩的大花紅景天粉末,每份2g,按照上述最佳工藝進行提取,即加20倍量的水,提取3次,每次90秒,測定提取液中紅景天苷含量,結果如表9所示。

表7三次工藝驗證結果

從上表可以看出,該工藝穩定可行。

實施例2對大花紅景天的純化工藝的研究

當提取液中乙醇含量達到60%~70%時,除鞣質、樹脂等外,其他雜質已基本上沉淀而除去,如果分2次加入乙醇,濃度逐步提高,最終達到75%~85%,除去雜質的效果更好,因此選擇兩次醇沉法除去雜質。

1.第一次醇沉工藝的考察

提取液的相對密度、醇沉濃度、醇沉時間為影響純化工藝的主要因素,對此三因素,選擇我們選擇L9(34)正交實驗進行優化,每個因素中選出常規的三個水平考慮,表8A為因素水平表:

表8A醇沉工藝因素水平表

取9份過50目篩的大花紅景天藥材,每份20g,分別加20倍量的水,微波提取3次,功率462w,每次90秒,合并提取液,提取液分別濃縮為一定相對密度(20℃測定)的濃縮液,加乙醇使含醇量達到一定的濃度,2~8℃靜置一定時間,過濾,分別測定濾液中紅景天苷含量和沉淀重量。實驗過程中的密度、濃度及時間按照下述正交試驗的編號進行,實驗結果見表8B。

表8B醇沉工藝實驗結果及分析

從上表可以看出,RA>RC>RB,A因素(相對密度)為影響一次醇沉實驗中紅景天苷最大的因素,其次是C因素(靜置時間),B因素的影響最小。方差分析顯示,三個因素對紅景天苷的影響均沒有極顯著性差異。從沉淀的情況來看,B因素(醇沉濃度)的對沉淀質量的影響較大。

從實際的工業生產成本及除雜質效果考慮,選擇A2B2C3較為合理,即濃縮到相對密度為1.10(20℃測定)的溶液,加乙醇使含醇量達到60%,2~8℃靜置48小時。

2.三次工藝驗證

取46g過50目篩的大花紅景天粉末,分別加20倍水,浸泡1.5小時,微波提取三次,功率462w,每次90秒,合并提取液,提取液分別濃縮到相對密度為1.10(20℃測定)的濃縮液,加乙醇使含醇量達到60%,2~8℃靜置48小時,過濾,分別測定濾液中紅景天苷含量和沉淀重量。結果見表9。

表9三次工藝驗證結果

從表9結果可以看出,該工藝穩定可行。

3.二次醇沉乙醇濃度的考察

取45g過50目篩的大花紅景天藥材,加20倍水,浸泡1.5小時,微波提取三次,功率462w,每次90秒,合并提取液,提取液分別濃縮到相對密度為1.10(20℃測定)的濃縮液,加乙醇使含醇量達到60%,2~8℃靜置48小時,過濾,濾液平均分成3份,加乙醇使含醇量分別為80%、85%、90%,2~8℃靜置24小時,過濾,分別測定濾液中紅景天苷含量和沉淀重量。結果見表10。

表10二次醇沉乙醇濃度的考察結果

??含醇量 ?藥液中紅景天苷含量(g) ?沉淀重量(g) ??紅景天苷轉移率(%) ??80% ??0.0631 ??0.0881 ??89.63 ??85% ??0.0656 ??0.1497 ??93.13 ??90% ??0.0651 ??0.2224 ??92.48

從表10結果可以看出,用85%乙醇溶液進行二次醇沉轉移率最高,用90%乙醇容液進行二次醇沉沉淀重量最高,結合工業生產的實際,選擇85%乙醇作為二次醇沉乙醇濃度。

4.二次醇沉靜置時間的考察

取45g過50目篩的大花紅景天藥材,分別加20倍水,浸泡1.5小時,微波提取三次,功率462w,每次90秒,合并提取液,提取液分別濃縮到相對密度為1.10(20℃測定)的濃縮液,加乙醇使含醇量達到60%,2~8℃靜置48小時,過濾,濾液平均分成3份,分別加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃分別靜置12、24、48小時,過濾,分別測定濾液中紅景天苷含量和沉淀重量。結果見表11。

表11二次醇沉靜置時間的考察結果

?靜置時間(h) ?藥液中紅景天苷含量(g) ?沉淀重量(g) ??紅景天苷轉移率(%) ??12 ??0.0596 ??0.1385 ??79.56 ??24 ??0.0633 ??0.1445 ??84.42 ??48 ??0.0642 ??0.1534 ??85.67

從表11結果可以看出,靜置48小時,紅景天苷轉移率最高,其次是24小時,但由于而者相差不大,所以選擇24小時作為二次醇沉靜置時間。

5.堿溶液醇沉淀法除鞣質pH值考察

取75g過50目篩的大花紅景天藥材,分別加20倍水,浸泡1.5小時,微波提取三次,功率462w,每次90秒,合并提取液,提取液分別濃縮到相對密度為1.10(20℃測定)的濃縮液,加乙醇使含醇量達到60%,2~8℃靜置48小時,過濾,濾液加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃靜置24小時,過濾,濾液平均分成5份,分別調pH值到8.0、8.5、9.0、9.5、10.0,2~8℃靜置24小時,過濾,測定濾液中紅景天苷含量和沉淀重量。結果見表12。

表12堿溶液醇沉淀法除鞣質PH值考察結果

?PH值 ??8.0 ??8.5 ??9.0 ??9.5 ??10.0 ?藥液中紅景天苷含量(g) ??0.0535 ??0.0582 ??0.0619 ??0.0591 ??0.0598 ?沉淀重量(g) ??0.0442 ??0.1148 ??0.2638 ??0.3527 ??0.3960 ?紅景天苷轉移率(%) ??79.86 ??86.87 ??92.30 ??82.70 ??83.58

從表12結果看出,pH值為9.0的時候,溶液中紅景天苷轉移率最高,而隨著pH值的增高,紅景天苷的轉移率逐漸下降,可能有一部分紅景天苷與堿反應損失了,因此選擇pH為9.0,但pH?8.5、9.0、9.5、10.0的濾液放置一段時間后仍有沉淀析出,后檢測紅景天苷含量,發現均降低,因此,pH值選擇調到8.0。

6.堿溶液醇沉淀法除鞣質時間考察

取45g過50目篩的大花紅景天粉末,分別加20倍水,浸泡1.5小時,微波提取三次,功率462w,每次90秒,合并提取液,提取液分別濃縮到相對密度為1.10(20℃測定)的濃縮液,加乙醇使含醇量達到60%,2~8℃靜置48小時,過濾,濾液加乙醇使含醇量達到85%,2~8℃靜置24小時,過濾,濾液平均分成3份,調pH值到8.0,2~8℃靜置12、24、48小時,過濾,測定濾液中紅景天苷含量和沉淀重量。結果見表13。

表13堿溶液醇沉淀法除鞣質時間考察結果

??靜置時間 ?藥液中紅景天苷含量(g) ?沉淀重量(g) ??紅景天苷轉移率(%) ??12 ??0.0644 ??0.1793 ??82.82 ??24 ??0.0678 ??0.2196 ??85.30 ??48 ??0.0637 ??0.2523 ??80.50

從表13可見,2~8℃靜置24小時,紅景天苷的轉移率最高,靜置48小時得到的沉淀量最大,可能有一部分紅景天苷與堿生成了鹽,從而導致了紅景天苷轉移率降低,因此選擇24小時作為除鞣質的靜置時間。

實施例3對大花紅景天的精制工藝的研究

本實施例對大花紅景天精制工藝中的樹脂型號、純化工藝條件等分別進行了研究。

1.大孔樹脂型號的選擇

取NK-2(購自天津精細化工有限公司)、SP825(購自日本三菱化工)、D101(購自日本三菱化工)、D301(購自日本三菱化工)、AB-8(購自南開大學化工廠)、HP-20(購自日本三菱化工)、SP700(購自日本三菱化工)、S-8(購自安徽三星樹脂科技有限公司)8種不同型號已經過預處理(預處理過程:以0.5BV的乙醇浸泡新購樹脂24小時,然后用樹脂體積3倍的乙醇與水交替反復洗脫2~3次,至醇洗脫液加水不顯混濁,最終以水洗脫,保持分離使用前的狀態)的大孔樹脂各5g,置250ml錐形瓶中,分別加入紅景天提取液25ml,置振蕩器中振搖3h,靜置1h,精密量取上清液1ml,HPLC法測定大孔樹脂對紅景天苷的吸附量,計算吸附率。然后,將以上8種樹脂濾出,水洗、濾紙吸干、精密加入25ml?70%乙醇溶液,置振蕩器中振搖3h,靜置1h,精密量取上清液1ml,同法測得大孔樹脂對紅景天苷的解吸附量,計算解吸附率。結果見表14。

表14大孔樹脂型號的考察結果

從表14的結果可以看出,SP825的吸附率(68.79%)僅次于SP700(71.17%),但解吸附率(97.17%)明顯高于SP700(95.32%)。

結論:選擇SP825來純化紅景天苷。

2.最大上樣量的選擇

取5份預處理后的SP825型大孔樹脂各5g,分別裝柱(φ2.2cm×8.5cm),按照樹脂與生藥材重量比為1∶0.5,1∶1,1∶2,1∶3,1∶4的比例,將紅景天提取液動態上樣,收集殘留液,水洗脫8BV,合并殘留液與水洗脫液,濃縮定容后,測定紅景天苷的含量,觀察紅景天苷的流失量與上樣量之間的關系,實驗結果見表18。

表15最大上樣量的考察結果

可見,當樹脂與生藥材之比為1∶0.5時,紅景天苷流失量與上樣量之比為4.45%,這個值已經偏大。

結論:樹脂與生藥材重量之比最大不得低于1∶0.5。

3.5%乙醇用量的選擇

黃松(獨腳金藥材質量研究,廣州中醫藥大學博士論文,2006)認為用大孔樹脂柱純化時先用水可以洗脫除掉大分子水溶性化合物,5%乙醇可以除掉大極性分子,如鞣質,多糖等。因此,在用洗脫劑洗脫前,先用水及5%乙醇除掉一些雜質以利于后面得到高純度的紅景天苷。

分別取5份SP825型大孔樹脂,每份5g,裝柱(φ2.2cm×8.5cm),分別用1BV、3BV、5BV、7BV、9BV的5%乙醇液洗脫,測定洗脫液中紅景天苷含量,結果見表16。

表165%乙醇用量的考察結果

選擇5%乙醇溶液洗脫的目的是盡量除掉一些極性較大的水溶性雜質,如多糖、鞣質等,同時又要使損失的紅景天苷盡量少。從表17結果看出,用3BV的5%乙醇對紅景天提取液進行洗脫,對紅景天苷的洗脫率只有0.123%,對紅景天苷的影響很小,可以忽略不計。因此,選擇3BV的5%乙醇對紅景天提取液進行純化。

4.洗脫劑濃度的選擇

取預處理后的SP825型大孔樹脂10g裝柱(φ2.2cm×8.5cm),按照大孔樹脂與生藥材1∶0.5的比例加入紅景天提取液,先用水洗脫至洗脫液近無色,收集洗脫液,并記錄下用水量,再依次加入5%、10%、15%、20%、25%的乙醇,每個濃度的乙醇均加10BV,依次收集,相同濃度的乙醇洗脫液合并,測定紅景天苷含量,實驗結果見表17。

表17洗脫劑濃度的考察結果

??乙醇濃度 ??5% ??10% ??15% ??20% ??25% ??紅景天苷含量(mg) ??4.4 ??7.6 ??1.7 ??0.63 ??0 ??紅景天苷洗脫率(%) ??29.71 ??51.13 ??11.45 ??4.23 ??0

本實驗分別選用了相同體積的5%、10%、15%、20%、25%的乙醇溶液作為紅景天苷的洗脫劑,以各自收集的洗脫液中紅景天苷的含量和洗脫率為考察指標,選擇合適的洗脫溶劑。從表17的實驗結果可以看出,相同洗脫體積條件下,10%乙醇溶液對紅景天苷的洗脫率最高。由于前面不同濃度乙醇溶液的洗脫,紅景天苷基本已完全被洗脫下來,25%乙醇溶液洗脫下來的洗脫液中已檢測不出紅景天苷,因此其紅景天苷含量和洗脫率均為0。因此,選擇10%乙醇作為紅景天苷的洗脫溶液。

5.洗脫劑用量的選擇

取5份預處理好的大孔樹脂10g裝柱(φ2.2cm×8.5cm),按樹脂與生藥材的比例為1∶0.5加入紅景天提取液,先用水洗至洗脫液無色,大約需要4BV,再用3BV的5%乙醇洗脫,然后用10%的乙醇分別洗脫2BV,4BV,6BV,8BV,10BV,合并各洗脫液,濃縮定容后測定浸膏量、紅景天苷含量及酪醇含量,測定結果見表18。

表18洗脫劑用量的考察結果

從表18可以看出,當10%的乙醇洗脫體積為10BV時,對紅景天苷的洗脫率達到76.2%,從上表的趨勢可以看出,如果增大洗脫體積,可能會洗脫下更多的酪醇,因此,選擇10BV作為洗脫紅景天苷的溶劑用量。

因此,紅景天苷用10BV?10%乙醇溶液進行洗脫比較合適。

6.藥液濃度、流速、徑高比的選擇

藥液濃度、流速、徑高比為影響純化工藝的三個重要因素,也是國家食品藥品監督管理局規定的中藥注射劑需要明確的工藝參數之一。對此三個因素,選擇L9(34)正交試驗進行優化,每個因素選出三個水平進行考察,表19A為因素水平表。

表19A精制條件的考察因素水平表

取9份10g?SP825型大孔樹脂,按照上述徑高比分別裝柱,分別取20g紅景天藥材9份,按照前述已確定的提取純化工藝進行提取純化,分別濃縮成上述藥液濃度,動態上柱,按照已確定的洗脫劑濃度(10%乙醇溶液)進行洗脫10BV,收集洗脫液,測定洗脫液中紅景天苷含量和純度。

表19B精制條件的考察實驗結果

從上表可以看出,對于紅景天苷洗脫量來說,RA>RB>RC,A因素(徑高比)為影響紅景天苷最大的因素,其次是B因素(藥液濃度),C因素的影響最小,方差分析顯示,三個因素對紅景天苷的影響均沒有極顯著性差異。從得到的紅景天苷的純度來看,B因素(藥液濃度)對紅景天苷純度的影響較大。

因此,結合兩個因素考慮,選擇A3B2C1較為合理,即濃縮到相對密度為1.5g/ml(生藥材重量與溶液體積之比)的溶液,大孔樹脂柱的徑高比為1∶30,流速為2BV/h。

7.三次驗證實驗

取3份10g?SP825型大孔樹脂,按照徑高比1∶30裝柱,分別取20g紅景天藥材3份,按照前述已確定的提取純化工藝進行提取純化,分別濃縮成藥液濃度為1.5g/ml(生藥材與藥液體積之比),動態上柱,用10%乙醇溶液以2BV/h的流速沖10BV,合并洗脫液,測定洗脫液中紅景天苷含量和純度,結果見表20。

表20三次驗證實驗結果

分析:三次驗證結果表明,該工藝穩定可行。

實施例4紅景天苷的優選制備方法

稱取210g紅景天粉末(過50目篩),加20倍水,浸泡1.5h,微波提取90s,提取三次,合并三次提取液,濃縮到相對密度1.10(20℃時測定),加乙醇使含醇量達到60%,2-8℃靜置48小時,過濾,濾液加乙醇使含醇量達到85%,2-8℃靜置24小時,過濾,濾液加堿調pH值到8.0,靜置24小時,過濾,濃縮到1.5g/ml(生藥材質量與溶液體積之比),裝入SP825型大孔樹脂,大孔樹脂與生藥材的質量之比是2∶1,徑高比為30∶1,流速2BV/h,分段收集,根據液相測定的結果,以紅景天苷含量大于90%為標準,達標的進行合并,不達標的反復精制2-3次即可達到標準,最后得到紅景天苷約480mg(純度92%)。

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一種 制備 紅景天 方法
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